微生物和生物醫(yī)學實驗室
生物安全通用準則

General biosafety standard

for microbiological and biomedical laboratories
 
中華人民共和國衛(wèi)生行業(yè)標準（WS　233－2002）
 
2002－12－03發(fā)布　2003－08－01實施
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
 
微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全通用準則
 
1  范圍
   本標準規(guī)定了微生物和生物醫(yī)學實驗室生物安全防護的基本原則、實驗室的分級、各級實驗室的基本要求。本標準為最低要求。
   本標準適用于疾病預防控制機構、醫(yī)療保健、科研機構。
2  規(guī)范性引用文件
   下列文件中的條款通過本標準的引用而成為本標準的條款。凡是注日期的引用文件，其隨后所有的修改單（不包括勘誤的內容）或修訂版均不適用于本標準，然而，鼓勵根據(jù)本標準達成協(xié)議的各方研究是否可使用這些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本適用于本標準。
GB 14925—2001  實驗動物  環(huán)境及設施
GB/T  16803—1997  采暖、通風、空調、凈化設備  術語
GB  50073—2001  潔凈廠房設計規(guī)范
JGJ  71—1990  潔凈室施工及驗收規(guī)范
3  定義
   本標準采用下列定義
3.1 實驗室生物安全防護 biosafety protection for laboratories
實驗室工作人員所處理的實驗對象含有致病的微生物及其毒素時，通過在實驗室設計建造、使用個體防護設置、嚴格遵從標準化的工作及操作程序和規(guī)程等方面采取綜合措施，確保實驗室工作人員不受實驗對象侵染，確保周圍環(huán)境有受其污染。
3.2  微生物危害評估 hazard assessment for microbes
對實驗微生物和毒素可能給人或環(huán)境帶來的危害所進行的評估。
3.3  氣溶膠 aerosol
懸浮于氣體介質中粒徑一般為0.001μm~1000μm的固體、液體微小粒子形成的膠溶狀態(tài)分散體系。
3.4  生物安全柜 biosafety cabinet
處理危險性微生物時所用的箱形空氣凈化安全裝置。
3.5  I級生物安全柜 class Ⅰbiosafety cabinet
至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作時柜正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部為操作窗口，外部空氣由操作窗口吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)時保證工作人員不受侵害，但不保證實驗對象不受污染。
3.6  II級生物安全柜 class Ⅱ biosafety cabinet
至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣。工作時正面玻璃推拉窗打開一半，上部為觀察窗，下部操作窗口。外部空氣由操作窗口吸進，而不可能由操作窗口逸出。工作狀態(tài)下遵守操作規(guī)程時既保證工作人員不受侵害，也保證實驗對象不受污染。
3.7  III級生物安全柜  class III biosafety cabinet
    至少裝置一個高效空氣過濾器對排氣進行凈化，工作空間為經(jīng)高效過濾器凈化的無渦流的單向流空氣，正面上部為觀察窗，下部為手套箱式操作口。箱內對外界保持負壓可確保人體與柜內物品完全隔絕。
3.8  物理抑制設備 physical containment device
用物理或機械方法防止致病微生物逸出的設備。
3.9  高效空氣過濾器  HEPA(high efficiency particulate air) filter
在額定風量下，對粒徑大于等于0.3μm的粒子捕集效率在99.97%以上及氣流阻力在245Pa以下的空氣過濾器。
3.10  相對壓強 relative pressure
絕對壓強減去大氣壓強之值。
4 實驗室生物安全防護的基本原則
4.1 總則
4.1.1  實驗室生物安全防護的內容包括安全設備、個體防護裝置和措施，實驗室的特殊設計和建設要求，嚴格的管理制度和標準化的操作程序及規(guī)程。
4.1.2  應將每一特定實驗室從立項、建設到使用維護的全過程中有關生物安全防護綜合措施的內容編入實驗室的生物安全手冊中。必須設有專職的生物安全負責人。
4.1.3  生物安全防護實驗室根據(jù)不同的微生物和防護要求分為四個生物安全防護級別。
4.2 安全設備和個體防護
安全設備和個體防護是確保實驗室工作人員與致病微生物及其毒素直接接觸的一級屏障。
4.2.1  生物安全柜是最重要的安全設備，形成最主要的防護屏障。實驗室應按要求分別配備Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ級生物安全柜。所有可能使致病微生物及其毒素濺出或產生氣溶膠的操作，除實際上不可實施外，都必須在生物安全柜內進行。不得用超凈工作臺代替生物安全柜。
4.2.2 必要時實驗室應配備其他安全設備，如設置配有排風凈化裝置的排氣罩等，或采用其他不使致病微生物逸出確保安全的設備。
4.2.3  實驗室所配備的離心機應在生物安全柜或本標準4.2.2中所指的其他安全設備中使用，否則必須使用安全密封的專用離心杯。
4.2.4  必須給實驗室工作人員配備必要的個體防護用品。
4.3  實驗室設計與建造的特殊要求
包括:實驗室的選址、平面布置、圍護結構、通風空調、安全裝置及特殊設備等設計與建造的特殊要求。
4.4  安全操作規(guī)程
4.4.1  本標準針對不同等級的生物安全防護實驗室所規(guī)定的安全操作規(guī)程，包括標準的安全操作規(guī)程和特殊的安全操作規(guī)程（見附錄A），必須在實驗室的生物安全手冊中明列并加以執(zhí)行。
4.4.2  針對不同的微生物及其毒素應補充規(guī)定相應的特殊安全操作規(guī)程，也應在各實驗室的生物安全手冊中明列并加以執(zhí)行。
4.5  致病微生物及其毒素在實驗室之間的傳遞
致病微生物及其毒素在實驗室之間的傳遞必須嚴格按照國家現(xiàn)行有關管理辦法執(zhí)行。
4.6  管理制度
4.6.1  實驗室基本管理
4.6.1.1  實驗室內的布置和準入
a）在主實驗室應合理設置清潔區(qū)、半污染區(qū)和污染區(qū)；
b）非實驗有關人員和物品不得進入實驗室；
c）在實驗室內不得進食和飲水，或者進行其他與實驗無關的活動；
d）實驗室工作人員、外來合作者、進修和學習人員在進入實驗室及其崗位之前必須經(jīng)過實驗室主任的批準。
4.6.1.2  實驗室工作人員的資格和培訓
a）實驗室的工作人員必須是受過專業(yè)教育的技術人員。在獨立進行工作前還需在中高級實驗技術人員指導下進行上崗培訓，達到合格標準，方可開始工作；
b）實驗室的工作人員必須被告知實驗室工作的潛在危險并接受實驗室安全教育，自愿從事實驗室工作；
c）實驗室的工作人員必須遵守實驗室的所有制度、規(guī)定和操作規(guī)程。
d）三級和四級生物安全防護實驗室的工作人員在開始工作前必須留本底血清進行有關檢測，以后定期復檢。如有疫苗必須進行免疫注射。
4.6.2 實驗室特殊管理
為避免和處理源于不安全操作引起的意外事故，必須嚴格執(zhí)行以下原則：
4.6.2.1  針對可能的的危險因素，設計保證安全的工作程序。
4.6.2.2  事前進行有效的培訓和摸擬訓練。
4.6.2.3  對于意外事故要能夠提供包括緊急救助或專業(yè)性保健治療的措施，足以應付緊急情況。
4.6.2.4  實驗室事故處理：工作人員在操作過程中發(fā)生意外，如針刺和切傷、皮膚污染、感染性標本濺及體表和口鼻眼內、衣物污染、污染試驗臺面等均視為安全事故。應視事故類型等不同情況，立即進行緊急處理。具體措施必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行。在緊急處理的同時必須向有關專家和領導匯報，并詳細記錄事故經(jīng)過和損傷的具體部位和程度等，由專家評估是否需要進行預防性治療。
4.6.2.5  應填寫正式的事故登記表，并按規(guī)定報告給國家相應級別的衛(wèi)生主管部門。
4.7  微生物危害評估
當建設使用傳染性或有潛在傳染性材料的實驗室前，必須進行微生物危害評估。應依據(jù)傳染性微生物致病能力的程度、傳播途徑、穩(wěn)定性、感染劑量、操作時的濃度和規(guī)模、實驗對象的來源、是否有動物實驗數(shù)據(jù)、是否有有效的預防和治療方法等諸因素進行微生物危害評估。
4.7.1  通過微生物危害評估確定對象微生物應在哪一級的生物安全防護實驗室中進行操作。
4.7.2  根據(jù)危害評估結果，制定相應的操作規(guī)程、實驗室管理制度和緊急事故處理辦法，必須形成書面文件并嚴格遵守執(zhí)行。
5  實驗室的分類、分級及適用范圍
5.1  分類
5.1.1  一般生物安全防護實驗室(不使用實驗脊椎動物和昆蟲)。
5.1.2  實驗脊椎動物生物安全防護實驗室。
5.2  分級
每類生物安全防護實驗室根據(jù)所處理的微生物及其毒素的危害程度各分為四級。各級實驗室的生物安全防護要求依次為：一級最低，四級最高。
5.3  適用范圍
5.3.1  一般生物安全防護實驗室
5.3.1.1  一級生物安全防護實驗室
實驗室結構和設施、安全操作規(guī)程、安全設備適用于對健康成年人已知無致病作用的微生物，如用于教學的普通微生物實驗室等。
5.3.1.2  二級生物安全防護實驗室
實驗室結構和設施、安全操作規(guī)程、安全設備適用于對人或環(huán)境具有中等潛在危害的微生物。
5.3.1.3  三級生物安全防護實驗室
    實驗室結構和設施、安全操作規(guī)程、安全設備適用于主要通過呼吸途徑使人傳染上嚴重的甚至是致死疾病的致病微生物及其毒素，通常已有預防傳染的疫苗。
    艾滋病病毒的研究(血清學實驗除外)應在三級生物安全防護實驗室中進行。 5.3.1.4  四級生物安全防護實驗室
實驗室結構和設施、安全操作規(guī)程、安全設備適用于對人體具有高度的危險性，通過氣溶膠途徑傳播或傳播途徑不明，目前尚無有效的疫苗或治療方法的致病微生物及其毒素。與上述情況類似的不明微生物，也必須在四級生物安全防護實驗室中進行。待有充分數(shù)據(jù)后再決定此種微生物或毒素應在四級還是在較低級別的實驗室中處理。
5.3.2  實驗脊椎動物生物安全防護實驗室，其適用微生物范圍與同級的一般生物安全防護實驗室相同。
6       一般生物安全防護實驗室的基本要求
6.1  一級生物安全防護實驗室
6.1.1  安全設備和個體防護
6.1.1.1  一般無須使用生物安全柜等專用安全設備。
6.1.1.2  工作人員在實驗時應穿工作服，戴防護眼鏡。
6.1.1.3  工作人員手上有皮膚破損或皮疹時應戴手套。
6.1.2  實驗室設計和建造的特殊要求
6.1.2.1  每個實驗室應設洗手池，宜設置在靠近出口處。
6.1.2.2  實驗室圍護結構內表面應易于清潔。地面應防滑、無縫隙，不得鋪設地毯。
6.1.2.3  實驗臺表面應不透水，耐腐蝕、耐熱。
6.1.2.4  實驗室中的家具應牢固。為易于清潔，各種家具和設備之間應保持生物廢棄物容器的臺(架)。
6.1.2.5  實驗室如有可開啟的窗戶，應設置紗窗。
6.2 二級生物安全防護實驗室
6.2.1 安全設備和個體防護
6.2.1.1  可能產生致病微生物氣溶膠或出現(xiàn)濺出的操作均應在生物安全柜(II級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設備中進行，并使用個體防護設備。
6.2.1.2  處理高濃度或大容量感染性材料均必須在生物安全柜(II級生物安全柜為宜)或其他物理抑制設備中進行，并使用個體防護設備。
上述材料的離心操作如果使用密封的離心機轉子或安全離心杯，且它們只在生物安全柜中開閉和裝載感染性材料，則可在實驗室中進行。
6.2.1.3  當微生物的操作不可能在生物安全柜內進行而必須采取外部操作時，為防止感染性材料濺出或霧化危害，必須使用面部保護裝置(護目鏡、面罩、個體呼吸保護用品或其他防濺出保護設備)。
6.2.1.4  在實驗室中應穿著工作服或罩衫等防護服。離開實驗室時，防護服必須脫下并留在實驗室內。不得穿著外出，更不能攜帶回家。用過的工作服應先在實驗室中消毒，然后統(tǒng)一洗滌或丟棄。
6.2.1.5  當手可能接觸感染材料、污染的表面或設備時應戴手套。如可能發(fā)生感染性材料的溢出或濺出，宜戴兩副手套。不得戴著手套離開實驗室。工作完全結束后方可除去手套。一次性手套不得清洗和再次使用。
6.2.2  實驗室設計和建造的特殊要求
6.2.2.1  生物安全防護二級實驗室必須滿足本標準6.1.2中各款的要求。
6.2.2.2  應設置實施各種消毒方法的設施，如高壓滅菌鍋、化學消毒裝置等對廢棄物進行處理。
6.2.2.3  應設置洗眼裝置。
6.2.2.4  實驗室門宜帶鎖、可自動關閉。
6.2.2.5  實驗室出口應有發(fā)光指示標志。
6.2.2.6  實驗室宜有不少于每小時3～4次的通風換氣次數(shù)。
6.3  三級生物安全防護實驗室
6.3.1  安全設備和個體防護
6.3.1.1 實驗室中必須安裝Ⅱ級或Ⅱ級以上生物安全柜。
6.3.1.2  所有涉及感染性材料的操作應在生物安全柜中進行。當這類操作不得不在生物安全柜外進行時，必須采用個體防護與使用物理抑制設備的綜合防護措施。
6.3.1.3  在進行感染性組織培養(yǎng)、有可能產生感染性氣溶膠的操作時，必須使用個體防護設備。
6.3.1.4  當不能安全有效地將氣溶膠限定在一定范圍內時，應使用呼吸保護裝置。
6.3.1.5  工作人員在進入實驗室工作區(qū)前，應在專用的更衣室(或緩沖間)穿著背開式工作服或其他防護服。工作完畢必須脫下工作服，不得穿工作服離開實驗室。可再次使用的工作服必須先消毒后清洗。
6.3.1.6  工作時必須戴手套(兩副為宜)。一次性手套必須先消毒后丟棄。
6.3.1.7  在實驗室中必須配備有效的消毒劑、眼部清洗劑或生理鹽水，且易于取用。可配備應急藥品。
6.3.2 實驗室設計和建造的特殊要求
6.3.2.1  選址
三級生物安全防護實驗室可與其他用途房屋設在一棟建筑物中，但必須自成一區(qū)。該區(qū)通過隔離門與公共走廊或公共部位相隔。
6.3.2.2  平面布局
    a)三級生物安全防護實驗室的核心區(qū)包括實驗間及與之相連的緩沖間。
    b)緩沖間形成進入實驗間的通道。必須設兩道連鎖門，當其中一道門打開時，另一道門自動處于關閉狀態(tài)。如使用電動連鎖裝置，斷電時兩道門均必須處于可打開狀態(tài)。在緩沖間可進行二次更衣。
c)當實驗室的通風系統(tǒng)不設自動控制裝置時，緩沖間面積不宜過大，不宜超過實驗間面積的八分之一。
    d)Ⅱ級或Ⅲ級生物安全柜的安裝位置應遠離實驗間入口，避開工作人員頻繁走動的區(qū)域，且有利于形成氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域的氣流流型。
6.3.2.3  圍護結構
    a)實驗室(含緩沖間)圍護結構內表面必須光滑耐腐蝕、防水，以易于消毒清潔。所有縫隙必須加以可靠密封。
    b)實驗室內所有的門均可自動關閉。
    c)除觀察窗外，不得設置任何窗戶。觀察窗必須為密封結構，所用玻璃為不碎玻璃。
    d)地面應無滲漏，光潔但不滑。不得使用地磚和水磨石等有縫隙地面。
e)天花板、地板、墻間的交角均為圓弧形且可靠密封，施工時應防止昆蟲和老鼠鉆進墻腳。
6.3.2.4  通風空調
    a)必須安裝獨立的通風空調系統(tǒng)以控制實驗室氣流方向和壓強梯度。該系統(tǒng)必須確保實驗室使用時，室內空氣除通過排風管道經(jīng)高效過濾排出外，不得從實驗室的其他部位或縫隙排向室外；同時確保實驗室內的氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域。進風口和排風口的布局應使實驗區(qū)內的死空間降低到最小程度。
    b)通風空調系統(tǒng)為直排系統(tǒng)，不得采用部分回風系統(tǒng)。
    c)環(huán)境參數(shù)：相對于實驗室外部，實驗室內部保持負壓。實驗間的相對壓強以－30Pa～－40Pa為宜，緩沖間的相對壓強以－15Pa～－20Pa為宜。實驗室內的溫、濕度以控制在人體舒適范圍為宜，或根據(jù)工藝要求而定。實驗室內的空氣潔凈度以GB 50073—2001《潔凈廠房設計規(guī)范》中所定義的七級至八級為宜。實驗室人工照明應均勻，不眩目，照度不低于500lx。
    d)為確保實驗室內的氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域，實驗室內不應使用雙側均勻分布的排風口布局。不應采用上送上排的通風設計。由生物安全柜排出的經(jīng)內部高效過濾的空氣可通過系統(tǒng)的排風管直接排至大氣，也可送入建筑物的排風系統(tǒng)。應確保生物安全柜與排風系統(tǒng)的壓力平衡。
    e)實驗室的進風應經(jīng)初、中、高效三級過濾。
    f)實驗室的排風必須經(jīng)高效過濾或加其他方法處理后，以不低于12m／s的速度直接向空中排放。該排風口應遠離系統(tǒng)進風口位置。處理后的排風也可排入建筑物的排風管道，但不得被送回到該建筑物的任何部位。
    g)進風和排風高效過濾器必須安裝在實驗室設在圍護結構上的風口里，以避免污染風管。
h)實驗室的通風系統(tǒng)中，在進風和排風總管處應安裝氣密型調節(jié)閥門，必要時可完全關閉以進行室內化學熏蒸消毒。
i）實驗室的通風系統(tǒng)中所使用的所有部件均必須為氣密型。所使用的高效過濾器不得為木框架。
j）應安裝風機啟動自動聯(lián)鎖裝置，確保實驗室啟動時先開排風機后開送風機。關閉時先關送風機后關排風機。
    k)不得在實驗室內安裝分體空調器。
6.3.2.5  安全裝置及特殊設備
    a)必須在主實驗室內設置Ⅱ級或Ⅲ級生物安全柜。其安裝位置應滿足6.3.2.5　d)中的要求。
    b)連續(xù)流離心機或其他可能產生氣溶膠的設備應置于物理抑制設備之中，該裝置應能將其可能產生的氣溶膠經(jīng)高效過濾器過濾后排出。在實驗室內所必須設置的所有其他排風裝置(通風櫥、排氣罩等)的排風均必須經(jīng)過高效過濾器過濾后方可排出。其室內布置應有利于形成氣流由“清潔”區(qū)域流向“污染”區(qū)域的氣流流型。
    c)實驗室中必須設置不產生蒸汽的高壓滅菌鍋或其他消毒裝置。
    d)實驗間與外部應設置傳遞窗。傳遞窗雙門不得同時打開，傳遞窗內應設物理消毒裝置。感染性材料必須放置在密閉容器中方可通過傳遞窗傳遞。
e）必須在實驗室入口處的顯著位置設置壓力顯示報警裝置，顯示實驗間和緩沖間的負壓狀況。當負壓指示偏離預設區(qū)間必須能通過聲、光等手段向實驗室內外的人員發(fā)出警報.可在該裝置上增加送、排風高效過濾器氣流阻力的顯示。
    f）實驗室啟動工作期間不能停電。應采用雙路供電電源。如難以實現(xiàn)，則應安裝停電時可自動切換的后備電源或不間斷電源，對關鍵設備(生物安全柜、通風櫥、排氣罩以及照明等)供電。
g)可在緩沖間設洗手池：洗手池的供水截門必須為腳踏、肘動或自動開關。洗手池如設在主實驗室，下水道必須與建筑物的下水管線分離，且有明顯標志。下水必須經(jīng)過消毒處理。洗手池僅供洗手用，不得向內傾倒任何感染性材料。供水管必須安裝防回流裝置。不得在實驗室內安設地漏。
6.3.2.6  其他
    a)實驗臺表面應不透水，耐腐蝕、耐熱。
    b)實驗室中的家具應牢固。為易于清潔，各種家具和設備之間應保持一定間隙。應有專門放置生物廢棄物容器的臺(架)。家具和設備的邊角和突出部位應光滑、無毛刺，以圓弧形為宜。
    c)所需真空泵應放在實驗室內。真空管線必須裝置在線高效過濾器。
    d)壓縮空氣等鋼瓶應放在實驗室外。穿過圍護結構的管道與圍護結構之間必須用不收縮的密封材料加以密封。氣體管線必須裝置在線高效過濾器和防回流裝置。
    e)實驗室中應設置洗眼裝置。
    f)實驗室出口應有發(fā)光指示標志。
    g)實驗室內外必須設置通訊系統(tǒng)。
    h)實驗室內的實驗記錄等資料應通過傳真機發(fā)送至實驗室外。
 6.4  四級生物安全防護實驗室
    四級生物安全防護實驗室分為：安全柜型實驗室和穿著正壓服型實驗室。在安全柜型實驗室中，所有微生物的操作均在Ⅲ級生物安全柜中進行。在穿著正壓服型實驗室中，工作人員必須穿著特殊的正壓服式保護服裝。
6.4.1  安全設備和個體防護
6.4.1.1  在實驗室中所有感染性材料的操作都必須在Ⅲ級生物安全柜中進行。如果工作人員穿著整體的由生命維持系統(tǒng)供氣的正壓工作服，則相關操作可在Ⅱ級生物安全柜中進行。
6.4.1.2  所有工作人員進入實驗室時都必須換上全套實驗室服裝，包括內衣、內褲、襯衣或連衫褲、鞋和手套等。所有這些實驗室保護服在淋浴和離開實驗室前均必須在更衣室內�